分享超声波细胞破碎仪的三大组成部件 细胞破碎仪如何操作

    细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达;

    使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体;

    另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。

    一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。

    超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。

    超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍;

    然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：

    50mMTris-HCl,pH8.0,2mMEDTA，100mMNaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%TritonX-100。切记冰浴超声！

    如何判断是否超声完全，根据经验，一般有以下几个方面：

    1，外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。

    2，液体的粘性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。

    3，高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000g10min,比一般离心收集菌体的转速高一点）。沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。

    4，染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检。

    （超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染）

    一些需要注意的问题：

    1，蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小;

    而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。

    2，如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率太强。

    3，超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。

    4，尽量防止泡沫的产生。

    由于超声波在液体中传播时产生剧烈地扰动作用，使颗粒产生很大的加速度，从而互相碰撞或与器壁互相碰撞而击碎。

    该作用亦足以使两种不相溶液体混合均匀。

    由于该超声波细胞粉碎仪能达到一般的机械搅拌或捣碎所达不到的效果；

    故在破碎动植物组织、病毒细菌和其它细胞结构以及在乳化分离、均质等化学反应过程中，超声波细胞粉碎仪还被广泛应用在生物化学、医学制药、食品检测、环保监测等领域。

    基于超声波在液体中的空化作用，换能器将电能量通过变幅杆在工具头顶部液体中产生高强度剪切力，形成高频的交变水压强，使空腔膨胀、爆炸将细胞击碎。

    体积小携带方便；

    超声探头为进口钛合金材质，经久耐用；

    振幅自动调节，在不同的负载状况时振幅保持*；

    超声波细胞粉碎仪采用微机控制，超声功率连续可调；

    高能效换能器,确保功效强劲。