如何正确使用荧光分光光度计来进行测试呢？以下为您详述：
荧光分光光度计测试步骤
(一)样品准备
1.液体样品根据用户提供的技术指标，检查浓度范围是否合适，如果需要稀释，则要考虑所需溶剂类型和稀释倍数。
2.固体样品均匀粉末、片状或具有光滑平面的块状样品，均可直接测定。
(二)操作步骤
1.开机：接通电源，打开主机开关，点燃(打开)光源后，根据说明书要求启动计算机。
2.检测前准备：参照仪器说明书，在20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。
3.工作条件的选择：环境温度应在20℃±5℃;相对湿度不大于70%;电源稳定，无磁场、电场干扰。根据样品的特性及荧光强度，选择合适的仪器工作条件(如狭缝、PM增益、响应时间等)。
4.基本测定
(1)荧光激发光谱测定
设置仪器参数，扫描发射波长，找到maxλem，以此为发射波长，记录发射强度作为激发波长的函数，便得到激发光谱。
(2)荧光发射光谱测定
设置仪器参数，扫描激发波长，找到maxλex，以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。
(3)差谱测定
设置仪器参数，选择合适的工作方式，测定背景溶液的发射光谱并储存起来，在一定的工作方式下，扫描样品溶液的发射波长，得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值，即差谱。
(4)峰面积积分
选择适当的工作方式，对样品溶液进行积分操作，即得到峰面积积分。
(5)荧光强度
选择合适的测量参数，设置λex、λem，采用定点读数或扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。
(6)定量测定
配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定的测定条件下，设置λex、λem，按照由稀至浓的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度—浓度的工作曲线，不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度，由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。
(三)分析结果的表述
1.荧光激发光谱、发射光谱以及其他光谱由仪器控制电脑直接绘出。
2.峰面积积分、荧光强度由仪器控制电脑计算显示。
3.定量测试：在相同的测定条件下，测定一系列已知浓度的标准溶液的荧光强度，绘制出荧光强度-浓度的工作曲线。浓度未知的溶液的荧光强度测定后，由工作曲线求出该溶液的浓度。
荧光分光光度计使用注意事项
1.在实验开始前，应提前打开仪器预热，并配制好所需的溶液，对于已经配制好的溶液，在不用时放在4℃冰箱中保存，放置时间超过一星期的溶液要重新配制。
2.实验所用的样品池是四面透光的石英池，拿取的时候用手指掐住池体的上角部，不能接触到四个面，清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。
3.在测试样品时，注意荧光强度范围的设定不要太高，以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。
4.实验结束后，要及时的清理台面，处理废液，清洗和放置好样品池，将下次要用的溶液放回冰箱，并且按规定登记实验记录，养成良好的实验习惯。
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定，不但可以做一般的定量分析，而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化，从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。
荧光分光光度计的原理：
由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态，这些处于激发态的分子是不稳定的，在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光。
不同物质由于分子结构的不同，其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时，其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系，即IF=KC，利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析，与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
荧光分光光度计与紫外分光光度计属一类产品，结构均由激发光源、单色器、样品室、光电倍 增管和读出（记录）装置所组成。但是它们光源是不同的，荧光分光光度计多采用高压汞灯、氙灯和激光光源。同时，荧光测量多采用激发光和发射光成直角的光路，仪器组件的布置有所不同。
下图为某型号荧光分光光度计的光学系统图，其主要工作原理是：当光源光束经入射单色器色散，提取所需波长单色光照射于样品上，由样品发出的荧光经发 射单色器色散后照射于光电倍增管，光电倍增管把荧光强度信号转化成电信号并经放器放大后记录或读出信号。
荧光分光光度计的光学系统图
1.氙灯（150W）；2.透镜；3.光束分裂器；4.水平狭缝；5.激发单色器光栅；6.参考放电管；7.关闸；8.样品室关闸；10.发射单色器光栅；12.光电倍增管
(1)激发光源：要比吸收法中光源强度大。
汞灯：发射强度大、稳定，不需复杂电源，但谱线不连续，数目少，主要用于滤片荧光计。
碘钨灯：提供连续光谱300~700mn。
氙灯：发出射线的强度大，谱线连续，分布于200~700 nm光域内，且在300~400nm 波段内射线强度几乎相等，但该灯的电源功率要求大，且电源稳定，因此电源结构复杂。
激光：发光强度大，能极大地提高荧光分析的灵敏度。
(2)样品池：通常由石英池（液体样品用）或固体样品架（粉末或片状样品）组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。低温荧光测定时在一样品池外套一个液氮的透明石英真空瓶。
(3)单色器：荧光分光计通常具有两个滤光片：第一滤光片在光源与样品池之间，滤去不需要的光，让需要的激发光通过。第二滤光片在样品池与检测器之间，滤去溶剂散射 光、容器表面散射光、杂质发出的光等，让待测物质发射的荧光通过。
荧光分光光度计通常具有两个光栅，位置同滤光片，单色性好。
(4)检测器：因荧光通常较弱，采用光电倍增管作检测器，灵敏度高。选择光电倍增管要考虑：响应波长、灵敏度和嗓声水平。 蓝敏管对蛋白质、核酸的测量适用，而红敏管则适用于荧光染料检测。
(5)显示系统：光度表、计算机操作系统等。
补充说明：与紫外分光光度计的结构区别：
1.荧光分光光度计采用的是垂直的测量方式，以消除透射光的影响。
2.检测器前面有无单色器，荧光分光光度计有两个单色器又上图可以看出，能够获得单色性较好的激发光并消除其他杂散光干扰。
正确了解荧光分光光度计的结构，也是能够帮助我们更好使用和操作，一定要仔细阅读哈~
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