分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器，它是一种使用率很高的实验室仪器。常用于核算、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。在印染方面，我们可以用分光光度计测量染色时燃料的上染百分率，以及整理在织的衣物上助剂的浓度，还可以用于颜色的测量。同时它还广泛的应用于食品检测、农药的检测以及工业上石油的检测等，紫外可见光光分度在实验室中的应用非常广泛。
分光光度计的组成
各种型号的可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个部分组成的，即光源、单色器、洗手池、检测器以及信号指示系统。如图所示：
光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统
分光光度计的基本原理
基于物质对不同波长的光的选择性吸收，不同的物质都有各自的吸收光谱，当光经色散后的光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光就会被溶液吸收。根据朗伯-比尔定律，当一束平行单色光照射到一定浓度的均匀溶液时，光强的减小程度和入射光的强度，溶液的浓度以及所透过溶液的长度成正比，其公式为：T=I/I0 A=LogI0/I=Kbc
其中：T:透色比 I0：入射光强 A：吸光度 I：头色光强度 K：吸收系数，1/mol/com b：液层厚,cm C：溶液的浓度,mol/l
光的吸收定律的使用范围
光的吸收定律不仅适用于有色溶液，也适用于无色溶液及气体和固体的非散射均匀体系，不仅适用于可见光的单色光，也适用于紫外和红外光区的单色光，但应注意，此定律仅适用于单色光和一定范围的低浓度溶液。溶液浓度过大时，透光性质发生变化，从容使溶液对光的吸收度与溶液浓度不成正比关系，波长交宽的混合光影响光的互补吸收，也会使测定产生误差。
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微量分光光度计能够快速准确的定量检测核酸、蛋白质等溶液。具有使用方便、消耗样品少(仅2μl)、不用预热、能迅速清理残留样品、不需要比色皿或其它样品定位装置、样品不需要稀释等特点，常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量，目前已成为众多实验室的常规仪器。
工作原理
超微量分光光度计进行浓度测定的原理是根据朗伯-比尔（Lamber-Beer）定律，A＝K·C·L 式中，A为吸光度；K为吸（消）光系数；C为溶液的浓度；L为液层厚度。此公式说明：在入射光一定时，溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度成正比。此式就是光的吸收定律的数学表达式，又叫朗伯-比尔定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度计使用频率最大的功能。可以定量测定溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA以及RNA含量。这是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收的特性，最大的吸收波长在260nm，吸收波谷在230nm。
除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白质直接定量
这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。
与传统分光光度计相比，超微量分光光度计要求的样品体积小，不需要比色皿，比色杯清洗方便，只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可。除此之外，实验过程也更为简单，不需预热，可随时检测，检测结果显示吸光度值的同时，程序直接给出浓度值。超微量分光光度计与传统相比，体积更小，更方便使用。
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