使用色谱柱温箱的有益之处 色谱柱操作规程

    在实际分析过程中，液相色谱仪流动相与色谱柱的温度，影响着组分的分离平衡，对于使用色谱柱温箱的有益之处有以下几点：

    1.可以使保留时间相对恒定，对需要进行的定性鉴别可提高其可信度；

    2.保留时间的重复性是色谱分析进行定量的基础，这一点在色谱仪检定规程中有严格的要求。不同的保留时间不仅不能判断其成份的一致性，同时，由于保留时间不同峰面积也必将发生变化，其检测结果的可信度将受质疑。

    3.温差较大时，因保留时间不稳将增加检测工作的复杂性。

    4.温度低的时候，因流动相黏度增加而使检测时间延长，同时增加泵的磨损，影响设备的使用寿命。

    5.如果温度过低也可能出现堵塞高压恒流泵、管路、进样阀、色谱柱的现象。其原因就是温度低溶解度相对下降而出现缓冲盐结晶。

    6.温度低时还因溶解度下降使杂质吸附在填料上而难于洗脱，从而影响色谱柱的使用寿命。

    色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。

    构造

    色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。

    柱管多用不锈钢制成，压力不高于70 kg/cm2 时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。

    为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。

    也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。

    色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20μm（5~10&μm），取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。

    色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类，尺寸规格也不同：

    ①常规分析柱（常量柱），内径2~5mm（常用4.6mm，国内有4mm和5mm），柱长10~30cm；

    ②窄径柱（narrow bore，又称细管径柱、半微柱semi-microcolumn），内径1~2mm，柱长10~20cm；

    ③毛细管柱（又称微柱microcolumn），内径0.2~0.5mm；

    ④半制备柱，内径>5mm；

    ⑤实验室制备柱，内径20~40mm，柱长10~30cm；

    ⑥生产制备柱内径可达几十厘米。柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。

    性能评价

    色谱柱的性能除了与固定相性能有关外，还与填充技术有关。

    在正常条件下，填料粒度>20μm时，干法填充制备柱较为合适；颗粒<20μm时，湿法填充较为理想。

    填充方法一般有4种：

    ①高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充；

    ②径向加压法；③轴向加压法，主要用于装填大直径柱；

    ④干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。

    必须指出，高效液相色谱柱的获得，装填技术是重要环节，但根本问题还在于填料本身性能的优劣，以及配套的色谱仪系统的的结构是否合理。

    无论是自己装填的还是购买的色谱柱，使用前都要对其性能进行考察，使用期间或放置一段时间后也要重新检查。

    柱性能指标包括在一定实验条件下（样品、流动相、流速、温度）下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性，或分离度。

    一般说来容量因子和选择性因子的重复性在±5%或±10%以内。

    进行柱效比较时，还要注意柱外效应是否有变化。

    一份合格的色谱柱评价报告应给出柱的基本参数，如柱长、内径、填料的种类、粒度、色谱柱的柱效、不对称度和柱压降等。