一、凝胶成像系统的原理?
样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样,以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析,就可以确定它的成份和性质。
样品对投射或者反射光有部分的吸收,从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度,通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。采用较新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀,最大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。
二、凝胶成像的适用范围?
1.蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析。
2.可以确定生物分子的分子量。
3.可以应用于生物分子的定量分析中。
三、凝胶成像一般操作步骤?
1.打开凝胶成像系统开关。
2.打开电脑,系统自动打开并进入成像软件。
3.打开凝胶成像系统前面板,选择使用紫外透射光源或者白光透射光源,将相应光源安放到位。
4.将样品放置在透射光源的样品台上。
5.在成像操作界面里面选择使用Upperwhite光源,点击绿色(即时成像)按钮。
四、是不是像素越高,产品就越好?
像素是要针对成像设备来看的,比如数码相机与CCD的像素就不具备可比性,其次CCD本身的质量比单纯的像素高低更重要。对于同级别CCD重要的指标是其大小,也就是CCD尺寸,尺寸越大其本身价值就成几何倍地增长。
五、配件紫外反射灯源的主要用途为何?
紫外反射灯源使用并不广泛,主要是提供非透明材质的DNA跑胶载体如纸层析等的成像需要而使用。由于比较常用的还是透明的琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶,透射光源完全可以满足,因此将紫外反射光源作为选配件不列入标配中。
六、为何要采用自动变焦镜头,有何意义?
自动变焦镜头无需手动调节,可操作性强,同时也减少了EB潜在的污染机会。再者使得将CCD内置成为了可能,从而达到防灰防尘防震的目的,更好地保护了核心部件延长产品的使用寿命。
七、如何看待CCD的一些主要技术参数?
CCD的主要技术参数有CCD尺寸,有效像素,信噪比,采集位数等。其中CCD尺寸与信噪比都是影响成像的关键因素,尺寸越大能接受的信号就越多。而热噪音越低,信噪比就越高,成像质量也就越好。采集位数指色彩灰度的表达范围。如采集位数为8则表示有2的8次方数量的灰度来还原色彩。
八、紫外对人体有伤害,是否具有防护措施?
紫外对人体,特别是眼睛有一定伤害,TOCAN凝胶成像系统具备紫外防护设施,在紫外灯开启的状态下,如不慎打开暗箱,紫外灯会自动熄灭防止对人体的伤害。
九、能否在凝胶成像上直接切胶?
TOCAN凝胶成像可以,如需直接切胶,首先按系统中间的观察窗,打开装有进口防紫外玻璃的观察窗口,然后打开左右两侧专为割胶所设计的小门,即可进行切胶操作。
10、如何调节焦距 聚焦 光圈以获得高质量的图片?
三个重要的可调参数分别是焦距聚焦和光圈。其中焦距调节清晰度,聚焦调节图像大小,光圈调节明暗。一般先把光圈调节到适宜的亮度后,再调节聚焦将图像放到最大,最后调解焦距,在图像较大的情况下焦距比较容易调节到清晰状态,然后再把图像缩放在适宜大小后成像即可。
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凝胶成像系统可以用于蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析。
(1)分子量定量
对于一般常用的DNA胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上DNA Marker条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结果较肉眼观察估计要准确很多。
(2)密度定量
一般常用的测定DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)浓度的方法是紫外吸收法,但它只能测定样品中的总核苷酸浓度,而不能区分各个长度片段的浓度。
利用凝胶成像系统和软件,先将DNA胶片上某一已知其DNA含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未知条带,根据与已知条带的密度做比较,可以得到未知DNA的含量。此方法也适用于对PAGE蛋白胶条带的浓度测定。
(3)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR实验扩增出来的条带不是一条,那么可以利用软件计算出各个条带占总体条带的相对百分数。
就此功能而言,与密度扫描类似,但实际在原理上并不相同。PCR定量是对选定的几条带进行相对密度定量并计算其占总和的百分数,密度扫描时并对选择区域生成纵向扫描曲线图并积分。
(4)密度扫描
在分子生物学和生物工程研究中,常用到的是对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分含量的计算。
传统的方法是利用专用的密度扫描,但利用生物分析软件结合现在实验室常规配备的扫描仪或者直接用白光照射的凝胶成像就能完成此项工作。
如今,凝胶成像分析系统已经不仅仅是种凝胶记下的手段,普遍应用于蛋白、DNA的凝胶记下中了,更是种印迹分析,数据获得的方式。
要挑选个合适的凝胶成像系统,各人要求根据目前的预算和未来研究要求来决定,市场上有众多的类型和型号可供选用,但是大要务必记住经常留意新的产品动向――快速发展的光学技术和成像分析软件也许能实现你以前想都不敢想的方便操作。
假如你现在就要求台凝胶成像系统,虽然目前你们实验室很小并且预算很紧,或者你不要求很多花俏的凝胶成像系统的功能,但是预知未来可能会要求更多复杂的性能的时候,好购买台能允许你升到满足你未来要求的凝胶成像系统。
总之选用凝胶成像系统第个要求考虑的您的需求,是观察可见光、荧光还是化学发光?其次是考虑产品的性能,是不是能拍出清晰锐利的照片?然后是产品的质量,是不是能够胜任长期工作,是不是在5年内不会出任何重大问题?后是售后服务,能否对产品熟悉,快速解决处理发生的问题或者客户的疑问?有些人还把利用该仪器曾经发表的文章当作参考。
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