除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。
蛋白质的直接定量(UV法)
这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，较佳的线性范围在1.0-1.5之间。实验中选择Warburg公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单;但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰;另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的混合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸(如酪氨酸，丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。
在使用分光光度计时，我们必须要注意一些使用后的维护，保养，和一些基本使用注意事项，才能达到更好的使用效果。
分光光度计的使用维护：
1、使用的吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。
2、取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。
3、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之间为宜。
4、测定时除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm以内，测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。
5、供试品应取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应取2份。平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。
6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。
7、单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内不能拆开,为防止色散元件受潮发霉,必须经常更换单色器盒干燥剂。
8、光电转换元件不能长时间曝光,应避免强光照射或受潮积尘。
由于分光光度计是一种常用的实验室分析仪器，款式和价格都是多样化的，因此如何选择一款合适的分光光度计就显得尤为重要了。尽管分光光度计种类繁多，但不外乎：简易型、中档型和高档型三大类。
一、简易型仪器及其特点：
结构：这种类型的仪器多为单光束型，即只有一束光照射到样品室内；光源一般仅有钨灯；样品支架一般为推拉式四联池架；波长选择多为手动查找，重复性差；狭缝为一个固定宽度模式；光学性能指标较低；检测器多为光敏二极管；显示器多为机械表头或数码管显示器，数据处理器一般没有。此类仪器生产以国内厂家居多。
测量模式：多为定点（固定波长）吸光度或透过率测量方式，基本不能进行波长扫描测量。
适应范围：小型实验室及示范教学，分析样品相对简单，测试结果精度要求不高。
二、中档型仪器及其特点：
结构：此类仪器多为双光束型或准双光束型，但也有单光束仪器型；光源有钨灯和氘灯；样品池支架为两个固定式，分别是样品通道和参比通道；波长按照设定模式自动查找或扫描；狭缝多数仍为2nm固定宽度模式，也有1.5nm狭缝宽度的；检测器多数是硅光二极管，但也有少数用光电倍增管的；光学性能相对较高，其中光栅的技术指标尤为重要，较佳的光栅为凹面型，为此无论在分辨率还是在杂散光方面指标要优于简易型仪器；显示器为液晶式或连接电脑，数据处理可由仪器自身具有的或外接计算机处理。并有一定的测量附件。
测量模式：透过率、吸光度、浓度直读、单光束；单点及扫描均可。
适应范围：此类仪器基本可满足大多实验室分析需要。
三、高档型仪器及特点：
除了中档仪器的特点外，主要是光学系统的设计和制造工艺水平更高了，比如使用了大尺寸的凹面光栅，并且光栅刻槽数大于1800条/mm；波长检测范围有的仪器在近红外区已经超过1100nm，可达到2600nm；狭缝均为连续可调型，以适应高分辨率的需要，波长扫描速度的档位也增加了，检测器均使用高灵敏度的光电倍增管和红外检测器；数据处理目前基本是电脑来执行；衡量一台仪器的另外一个指标是看此仪器是否具有丰富的附属测量器件，如偏振附件、积分球附件、反射附件、自动进样器附件、色度分析软件、薄膜附件等等。
测量模式：透过率、吸光度、浓度直读、反射方式、能量方式，单点、扫描均可；
适应范围：科研、光学产品的检测、生化样品检测、复杂样品检测等。不但可以测液态样品，也可测固态样品。
449717568