分光光度计的基本原理是:物质在光的照射下会产生对光吸收的效应,而且物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同物质都具有其各自的吸收光谱。
因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能星就会被不同程度的吸收,光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系,即符合比耳定律。
在使用可见分光光度计前先了解一下的操作规程没有错。
开机
1、开机前,检查电源插座是否接上;
2、启动电源开关,仪器显示"723C"
3、仪器经自测后,按"MODE"键后再按"2"键,仪器显示"DATA"
基本使用方法
1、按"GO TO λ"键,输入设定波长;
2、四个比色皿,其中R位置放置参比试样,其余三个放入待测试样。将比色皿放入样品池内的比色皿架中,盖上样品池盖;
3、将参比试样推入光路,按"ABS%"键,使仪器自动调零和置满度;
4、然后将待测试样推入光路,显示试样的吸光度值;
5、如果要想将待测试样的数据打印出,只需按"START/STOP"键即可。
可见分光光度计的使用注意事项
每天使用结束后,应仔细检查样品室内是否有溶液溢出,若有溢出必须随时用滤纸吸干;
仪器使用完毕,用防尘套罩住。
1、测量波长 在定量分析中,为了提高测定的灵敏度,入射光的波长应选择被测物的最大吸收波长λmax,如果λmax有干扰,可选择另一条灵敏度稍低、但能避免干扰的谱线,所以,适当选择入射光的波长,不仅能提高测定的灵敏度,还能提高测定的准确度。 2、狭缝宽度 狭缝宽度过大,入射光的单色性差;狭缝宽度太小,入射光的强减弱。狭缝宽度过大或过小均会造成灵敏度降低,较佳选择是产生最小误差情下的最大狭缝。一般选用仪器的狭缝宽琶度应小于待测样品吸收带的半宽度,否则测得的吸光度值会偏低,狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸光度不再;加为准,对于大部分被测品种,可以使用2nm缝宽。 3、控制适当的吸光度范围 可通过控制被测物浓度或改变吸收池厚度来实现吸光度合理的范围,以尽量减小测量误差。一般吸光度尽量控制在0.1-0.8范围。 4、空白溶液的选择 空白溶液是用来调节吸光度测量工作零点即A=0,T=100%的溶液,以消除溶液中其它基体组分以及吸收池和溶剂对入射光的反射和吸收所带来的误差。根据情况不同,常用空白溶液有如下几种选择。 ①溶剂空白当溶液中只有待测组分在测定波长下有吸收,而其它组分无吸收时,可用纯溶剂作空白。 ②试剂空白如果显色剂或其它试剂有吸收,而待测试样溶液无吸收,则用不加待测组分的其它试剂作空白。 ③试样空白如果试样基体有吸收,而显色剂或其它试剂无吸收,则用不加显色剂的试样溶液作空白。
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