X
仪器交易网
0我的购物车 >
购物车中还没有商品,赶紧选购吧!

最新文章更多>>

如何优化SEC分离色谱条件?

时间:2022-10-28    来源:    作者:仪多多网     

体积排阻色谱法(SEC)是液相色谱的一种主要分离模式,近年来被广泛地应用在各个行业,是研究分子量及分子量分布测试、研究聚合物分子结构,其原理以及方法优化的方法你了解吗?

一、分离原理

尺寸排阻色谱法是按分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法,也称凝胶色谱法。排阻色谱的固定相多为凝胶。凝胶是一种由有机分子制成的分子筛其表面惰性含有许多不同大小孔穴或立体网状结构。凝胶的孔穴大小与被分离组分大小相当对不同大小的组分分子则可分别渗到凝胶孔内的不同深度。尺寸大的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内但进不了小孔甚至于完全被排斥,先流出色谱柱。尺寸小的组分分子大孔小孔都可以渗进去最后流出。因此大的组分分子在色谱柱中停留时间较短很快被洗出。小的组分分子在色谱柱中停留时间较长。经过一定时间后各组分按分子大小得到分离。当组分X进入柱子后它就要从高浓度的流动相向固定相孔隙内的流动相扩散。当组分X进入色谱固定相达到扩散平衡时:Xm⇌Xn组分的分配系数为:K=【Xs】/【Xm】

尺寸排阻色谱中任何组分的分配系数应符合:0≤K≤1

二、SEC分离色谱条件优化

影响SEC色谱分离的主要有以下5个因素:

1、温度:一般情况SEC分离是在常温下进行,升高温度优点:1、提高柱效;2、提高分离度;3、降低流动相粘度;4、增加样品的溶解度(聚烯烃、聚酰胺)

2、流速:随着分子量增大,最优流速逐步降低

3、进样体积:一般色谱柱进样体积为柱体积的1%

4、样品负载:对于制备蛋白纯化,一般情况下10-20mg/ml。

5、流动相聚合物基质:一些聚合物基质中会含有少量的羧酸,因次具有一定的负电性。会与负电性的物质发生静电作用。抑制静电作用:增加离子强度。

6、硅胶基质硅胶基质中残留和可接近的硅醇基,在一定条件下硅醇基会发生解离,当pH值增大时,碱性物质会与硅胶基质发生相互作用,会增大物质的保留。酸性物质则由于表面的推动作用洗脱会比预期更早。调节流动相pH值。




上一篇:钢管混凝土检测结果评定

下一篇:新标准:路面冰点检测方法已发生...

  • 手机多多
  • 官方微信订阅号
商品已成功加入购物车!