体积排阻色谱法(SEC)是液相色谱的一种主要分离模式，近年来被广泛地应用在各个行业，是研究分子量及分子量分布测试、研究聚合物分子结构，其原理以及方法优化的方法你了解吗?
一、分离原理
尺寸排阻色谱法是按分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法，也称凝胶色谱法。排阻色谱的固定相多为凝胶。凝胶是一种由有机分子制成的分子筛，其表面惰性，含有许多不同大小孔穴或立体网状结构。凝胶的孔穴大小与被分离组分大小相当，对不同大小的组分分子则可分别渗到凝胶孔内的不同深度。尺寸大的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内，但进不了小孔，甚至于完全被排斥，先流出色谱柱。尺寸小的组分分子，大孔小孔都可以渗进去，最后流出。因此，大的组分分子在色谱柱中停留时间较短，很快被洗出。小的组分分子在色谱柱中停留时间较长。经过一定时间后，各组分按分子大小得到分离。当组分X进入柱子后，它就要从高浓度的流动相向固定相孔隙内的流动相扩散。当组分X进入色谱固定相达到扩散平衡时：Xm⇌Xn组分的分配系数为：K=【Xs】/【Xm】
尺寸排阻色谱中任何组分的分配系数应符合：0≤K≤1
二、SEC分离色谱条件优化
影响SEC色谱分离的主要有以下5个因素：
1、温度：一般情况SEC分离是在常温下进行，升高温度优点：1、提高柱效;2、提高分离度;3、降低流动相粘度;4、增加样品的溶解度(聚烯烃、聚酰胺)
2、流速：随着分子量增大，较优流速逐步降低
3、进样体积：一般色谱柱进样体积为柱体积的1%
4、样品负载：对于制备蛋白纯化，一般情况下10-20mg/ml。
5、流动相：聚合物基质：一些聚合物基质中会含有少量的羧酸，因次具有一定的负电性。会与负电性的物质发生静电作用。抑制静电作用：增加离子强度。
6、硅胶基质：硅胶基质中残留和可接近的硅醇基，在一定条件下硅醇基会发生解离，当pH值增大时，碱性物质会与硅胶基质发生相互作用，会增大物质的保留。酸性物质则由于表面的推动作用洗脱会比预期更早。调节流动相pH值。
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