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HPLC液相色谱柱的分离模式及特征探讨

时间:2022-07-06    来源:    作者:仪多多网     

液相色谱柱种类繁多,在选择液相色谱柱之前,首先必须选择HPLC的分离模式,根据使用的固定相和流动相的组合不同,可以得到下列各种各样的分离模式。

一、反相法(RPC)

1、根据在固定相(填料)和流动相(溶剂)中分配系数不同分离

2、固定相极性比流动相低

3、采用甲醇、乙睛、THF等有机溶剂和水或缓冲溶液的混合溶液作流动相

4、流动相极性越低,洗脱力越强

二、亲水性相互作用法(HILIC)

1、根据亲水性相互作用进行分离

2、使用极性高的固定相

3、采用乙腊等有机溶剂和水或缓冲溶液的混合溶液作流动相

4、流动相的极性越高,洗脱力越强

5、适用于分析极性高的物质

三、正相法(NPC)

1、样品在固定相和流动相中分配系数不同进行分离

2、固定相极性比流动相高

3、采用己烷、异丙醇等有极性差异的有机溶剂的混合溶液作流动相

4、流动相极性越高,洗脱力越强

四、配位体交换法(LEX)

1、根据络合原理分离

2、采用与磺基配位金属离子的固定相

3、组合使用尺寸排阻法和亲水性相互作用法分离机制

五、离子排阻法(IEX)

1、根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用(排斥)进行分离

2、离子化较早洗脱,非离子化物质较晚洗脱

3、主要适用于有机酸的分析

六、离子色谱法(IC)

1、根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用(结合)分离

2、因为使用低浓度的流动相,可以使用电导检测器

3、主要适用于无机离子的分析

七、尺寸排阻法(SEC)

1、利用高分子填料的网状结构或细孔的分子筛作用来分离

2、基于尺寸排阻色谱法来分离,必须在填料与样品分子间无相互作用力的条件下测试

3、样品中的成分按照分子尺寸从大到小的顺序洗脱

4、适用于高分子化合物的分子量测定、分子量分布测定及低聚物的组成分析等

八、离子交换法(IEC)

1、根据离子交换体和离子溶质的静电相互作用(结合)进行分离

2、采用在分析试样电荷差最大的pH下具有充分缓冲能力的缓冲液作流动相

3、可通过流动相的pH、盐浓度或离子强度来调节样品的洗脱位置

九、疏水性相互作用法(HIC)

1、根据疏水性相互作用进行分离

2、固定相键合疏水性基团

3、通常情况下高盐浓度下吸附,盐浓度降低后洗脱

4、主要适用于蛋白质的分析

十、亲和色谱法(AFC)

1、根据生物的分子识别能力来分离

2、有很高的选择性

3、采用相互作用及配位体种类、pH、离子强度适合分析样品的缓冲液

4、主要适用于生理活性物质的净化和浓缩

十一、手性分离法(CS)

1、根据手性分子识别能力的不同来分离

2、有很高的选择性

十二、复合模式

1、支持复合分离模式分离




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